• Рядом с метро Кропоткинская
  • Работаем каждый день с 9:00 до 20:00
  • Стоимость консультации 900 рублей

ПЦР уреаплазма

Проблема диагностики уреаплазмоза у женщин и мужчин уже давно привлекает внимание врачей.

мазок ПЦР на уреаплазму

Благодаря прогрессу в молекулярно-генетических исследованиях, медики наконец получили надежный и качественный метод. Сокращенно он называется ПЦР - полимеразно-цепная реакция.

Причины диагностического поиска

Реальные цифры распространенности уреаплазмоза в человеческой популяции подсчитать невозможно. Причина в том, что эти микроорганизмы сложно выявить.

Бактериоскопические методы неэффективны из-за мелких размеров возбудителей.

Иммунологические иногда дают ложноположительные результаты. И тем не менее сейчас доказано, что около 20% репродуктивных потерь связаны именно с уреаплазменной инфекцией. В связи с этим очень большое значение приобретает раннее выявление инфекции. Желательно - на этапе подготовки к беременности, или при постановке на учет в женскую консультацию. Это позволило бы на 10-15% снизить количество ранних выкидышей и осложненных вариантов течения беременности.

Особенности возбудителей

По микробиологической номенклатуре, уреаплазмы относятся к классу Mollicutes. Это очень мелкие, лишенные ядер и сложных органелл микроорганизмы.

возбудитель уреаплазмоза

Паразитируют внутриклеточно, из-за чего организму сложно обеспечить адекватный иммунный ответ. Примечательно, что до сих пор в среде ученых нет единого мнения о патогенности уреаплазм. Однако примерно у 80% женщин с признаками хронического воспаления половых органов находят микробов класса Mollicutes, рода Ureaplasma.

Тщательное изучение показало, что среди уреаплазм патогенными являются два вида:

  • U. parvum.
  • U. urealyticum.


Клиническая разница между ними достаточно заметна, из-за чего идентификация возбудителей имеет заметное значение. Так, микробы вида парвум (U. parvum) чаще становятся причиной негонококковых уретритов у мужчин. А уреаплазму уреалитикум (U. urealyticum) обычно находят у женщин с хроническими воспалительными процессами органов малого таза. В целом по человеческой популяции более распространен вид парвум.

Показания к ПЦР обследованию

Искать микробов класса Mollicutes у всех людей бессмысленно. Результаты будут положительными едва ли не у 40-60% обследованных пациентов. И даже у тех, у кого не будет никаких признаков патологии. Именно поэтому есть ученые, которые относят эти микроорганизмы к сапрофитам и не считают патогенными.

Оптимальным обследование на микоплазму и уреаплазму считается в таких случаях:

  • Женщины с признаками хронического воспаления органов малого таза.
  • Женщины с самопроизвольным прерыванием беременности в анамнезе.
  • Мужчины с явлениями хронического уретрита, простатита.
  • Бесплодные пары.

диагностика бесплодия

И, конечно, в современных условиях можно пройти обследование по собственному желанию. Как поступить, чтобы обследование получилось максимально информативным, а результат - точным? Желательно обратиться к профессиональному врачу и у него взять направление на оптимальный в данном случае метод обследования.

Теоретическое обоснование ПЦР

В сложных научных терминах методика полимеразно-цепной реакции описывается как «гибридизационный метод анализа ДНК. Он основан на комплементарном взаимодействии специфических полинуклеотидных зондов с искомой матрицей - цепями ДНК в реакционной смеси». Речь идет о реакции искусственного синтеза уникальной молекулы ДНК отдельного патогенного микроорганизма. В нашем случае это - уреаплазмы.

Чтоб процесс запустился, необходимо чтоб в исследуемом образце был обнаружен хотя бы один образец, фрагмент искомой ДНК.

поиск фрагмента ДНК

За счет этого и обеспечивается высокая специфичность теста. Чувствительность ПЦР в диагностике инфекции тоже достаточно высока и превосходит таковую при иммунологических методиках. Правда, очень многое в этом плане зависит от того, как берут диагностический материал.

Преимущества ПЦР в диагностике

Собственно говоря, полимеразно-цепная реакция является единственным оптимальным методом прямой диагностики уреаплазмоза.

ПЦР в лаборатории

Потому что увидеть возбудителей в микроскоп невозможно. А для культурального исследования необходимы сложные в производстве питательные субстраты с клеточным компонентом.

Положительные стороны методики:

  • Очень высокие показатели чувствительности и специфичности.
  • Наличие двух типов реакции - качественной и количественной.
  • Возможность выявления мутаций в геноме уреаплазм, которые определяют стойкость возбудителей к определенным противомикробным средствам.
  • Широкий выбор диагностических материалов: кровь, отделяемое из влагалища, цервикальная слизь, моча, сперма, секрет простаты.
  • Быстрое получение результатов.
  • Минимальная роль человека, что значительно снижает вероятность ошибок.


В клинической практике наиболее важны первые три пункта из списка. Они в некотором роде дублируют наиболее информативный метод любых бактериологических исследований - культуральный посев. Вот только молекулярно-генетическая методика дает ответы на все эти вопросы в течение нескольких часов, а не дней.

Недостатки ПЦР в диагностике

Их гораздо меньше, чем преимуществ.

Основные:

  • Высокая стоимость оборудования и расходных материалов для проведения реакции.
  • Ложноотрицательные результаты при неправильном заборе диагностического материала.


Вот, в принципе, и все. Чтоб снизить себестоимость одного анализа, производители выпускают системы, предназначенные для проведения сразу нескольких десятков анализов.

ПЦР-амплификатор в лаборатории

Пока лаборатория не насобирает необходимое количество проб, приходится подождать. Отсюда проистекает необходимость долгого ожидания результатов, хотя сам процесс ПЦР длится 4-5 часов. Снизить влияние второго фактора можно путем обращения для сбора диагностического материала к квалифицированному врачу.

Постановка реакции

Для диагностики в разных случаях применяются разные методики. Сначала людям с показаниями к исследованию (мы перечисляли их немного выше) рекомендуется сделать качественную реакцию. И если она окажется положительной - то пролечиться и потом провести уже количественную ПЦР. Такой контроль после лечения позволяет убедиться в том, что терапия возымела эффект, и организм человека полностью очистился от уреаплазм.

Качественная проба

Аппарат для постановки ПЦР называется амплификатором.

Процесс состоит из трех этапов:

  • Обработка исследуемого материала с целью «расплетения» нуклеиновых кислот в пробе (всех - и микробных тел и клеток самого человеческого организма) или денатурация. Длительность этого этапа - около минуты.
  • Процесс гибридизации. Именно в это время проходит реакция поиска и идентификации ДНК материала уреаплазм. Требуется 20-60 секунд.
  • Репликация обнаруженных нуклеиновых кислот искомых возбудителей - примерно 30 секунд.

Таких циклов проводится не менее 40, из-за чего общая длительность постановки ПЦР достигает часа и более. Затем 2-3 часа необходимо технике для подсчета результатов. Если в первом образце была обнаружены ДНК уреаплазмы, то к 40-му циклу количество таких ампликонов в исследуемом субстрате вырастает в геометрической прогрессии. И достигает той концентрации, когда их можно будет достоверно обнаружить иммунологическими методиками. В случае, когда в пробе не было изначально генома уреаплазм, то последующие циклы будут проходить как бы в холостую. И потому иммунофорез на плотном агаре или флуоресцентная детекция окажутся отрицательными.

Промышленностью выпускается несколько видов реактивов для второго этапа ПЦР. Среди них есть такие, что прореагируют только с ДНК U. parvum или только с ДНК U. Urealyticum. Или с только теми участками ДНК уреаплазм, которыми кодируется медикаментозная резистентность возбудителейЭто позволяет методике достигать беспрецедентной специфичности и за очень короткое время обнаруживать стойкость микробов к лекарствам.

Количественная проба

Ее еще называют ультрачувствительной. Отличие в том, что каждый вновь синтезированный ампликон помечается молекулой люминофора и светится под ультрафиолетом. После 30-40 циклов амплификации специальный аппарат проводит хроматографический анализ пробы и подсчитывает количество «маячков». Затем математическими методами рассчитывает исходное число микробных тел.

Комплекс ПЦР хламидии, уреаплазма и микоплазма

Эпидемиологической особенностью современных инфекций, передающихся половым путем (ИППП) является микст. То есть передача сразу нескольких возбудителей.

Практика показывает, что вместе с возбудителями класса Mollicutes часто обнаруживаются хламидии. Для них также характерно вялое малосимптомное воспаление. Поэтому существенное клиническое значение приобретает комплексная диагностика пациентов.

В особенности - женщин, планирующих беременность или с признаками хронических воспалительных процессов со стороны органов малого таза.

Тогда грамотный врач поступает так:

  • Сначала делает микроскопию обычного гинекологического или урологического мазка.

микроскопия мазка

  • При наличии признаков воспаления без явного возбудителя - назначается комплекс ПЦР.


Возможности современных лабораторий позволяют сделать молекулярно-генетический анализ сразу на несколько возбудителей с дифференцировкой каждого вида. То есть в результатах указывается факт наличия или отсутствия у пациента отдельно хламидий, отдельно микоплазм и отдельно - уреаплазм. Такая возможность удешевляет диагностику и заодно - делает ее более полной, разносторонней.

Дальнейшая врачебная тактика зависит от результатов обследований. Идеальный результат терапии - если на ПЦР ДНК уреаплазм после лечения не обнаружено. Достичь негативизации результатов можно только в сотрудничестве с квалифицированным дерматовенерологом.