Проблема диагностики уреаплазмоза у женщин и мужчин уже давно привлекает внимание врачей.

Благодаря прогрессу в молекулярно-генетических исследованиях, медики наконец получили надежный и качественный метод. Сокращенно он называется ПЦР - полимеразно-цепная реакция.

Причины диагностического поиска

Реальные цифры распространенности уреаплазмоза в человеческой популяции подсчитать невозможно. Причина в том, что эти микроорганизмы сложно выявить.

Бактериоскопические методы неэффективны из-за мелких размеров возбудителей.

Иммунологические иногда дают ложноположительные результаты. И тем не менее сейчас доказано, что около 20% репродуктивных потерь связаны именно с уреаплазменной инфекцией. В связи с этим очень большое значение приобретает раннее выявление инфекции. Желательно - на этапе подготовки к беременности, или при постановке на учет в женскую консультацию. Это позволило бы на 10-15% снизить количество ранних выкидышей и осложненных вариантов течения беременности.

Особенности возбудителей

По микробиологической номенклатуре, уреаплазмы относятся к классу Mollicutes. Это очень мелкие, лишенные ядер и сложных органелл микроорганизмы.

Паразитируют внутриклеточно, из-за чего организму сложно обеспечить адекватный иммунный ответ. Примечательно, что до сих пор в среде ученых нет единого мнения о патогенности уреаплазм. Однако примерно у 80% женщин с признаками хронического воспаления половых органов находят микробов класса Mollicutes, рода Ureaplasma.

Тщательное изучение показало, что среди уреаплазм патогенными являются два вида:

• U. parvum.
• U. urealyticum.

Клиническая разница между ними достаточно заметна, из-за чего идентификация возбудителей имеет заметное значение. Так, микробы вида парвум (U. parvum) чаще становятся причиной негонококковых уретритов у мужчин. А уреаплазму уреалитикум (U. urealyticum) обычно находят у женщин с хроническими воспалительными процессами органов малого таза. В целом по человеческой популяции более распространен вид парвум.

Показания к ПЦР обследованию

Искать микробов класса Mollicutes у всех людей бессмысленно. Результаты будут положительными едва ли не у 40-60% обследованных пациентов. И даже у тех, у кого не будет никаких признаков патологии. Именно поэтому есть ученые, которые относят эти микроорганизмы к сапрофитам и не считают патогенными.

Оптимальным обследование на микоплазму и уреаплазму считается в таких случаях:

• Женщины с признаками хронического воспаления органов малого таза.
• Женщины с самопроизвольным прерыванием беременности в анамнезе.
• Мужчины с явлениями хронического уретрита, простатита.
• Бесплодные пары.
   

И, конечно, в современных условиях можно пройти обследование по собственному желанию. Как поступить, чтобы обследование получилось максимально информативным, а результат - точным? Желательно обратиться к профессиональному врачу и у него взять направление на оптимальный в данном случае метод обследования.

Теоретическое обоснование ПЦР

В сложных научных терминах методика полимеразно-цепной реакции описывается как «гибридизационный метод анализа ДНК. Он основан на комплементарном взаимодействии специфических полинуклеотидных зондов с искомой матрицей - цепями ДНК в реакционной смеси». Речь идет о реакции искусственного синтеза уникальной молекулы ДНК отдельного патогенного микроорганизма. В нашем случае это - уреаплазмы.

Чтоб процесс запустился, необходимо чтоб в исследуемом образце был обнаружен хотя бы один образец, фрагмент искомой ДНК.

За счет этого и обеспечивается высокая специфичность теста. Чувствительность ПЦР в диагностике инфекции тоже достаточно высока и превосходит таковую при иммунологических методиках. Правда, очень многое в этом плане зависит от того, как берут диагностический материал.

Преимущества ПЦР в диагностике

Собственно говоря, полимеразно-цепная реакция является единственным оптимальным методом прямой диагностики уреаплазмоза.

Потому что увидеть возбудителей в микроскоп невозможно. А для культурального исследования необходимы сложные в производстве питательные субстраты с клеточным компонентом.

Положительные стороны методики:

• Очень высокие показатели чувствительности и специфичности.
• Наличие двух типов реакции - качественной и количественной.
• Возможность выявления мутаций в геноме уреаплазм, которые определяют стойкость возбудителей к определенным противомикробным средствам.
• Широкий выбор диагностических материалов: кровь, отделяемое из влагалища, цервикальная слизь, моча, сперма, секрет простаты.
• Быстрое получение результатов.
• Минимальная роль человека, что значительно снижает вероятность ошибок.

В клинической практике наиболее важны первые три пункта из списка. Они в некотором роде дублируют наиболее информативный метод любых бактериологических исследований - культуральный посев. Вот только молекулярно-генетическая методика дает ответы на все эти вопросы в течение нескольких часов, а не дней.

Недостатки ПЦР в диагностике

Их гораздо меньше, чем преимуществ.

Основные:

• Высокая стоимость оборудования и расходных материалов для проведения реакции.
• Ложноотрицательные результаты при неправильном заборе диагностического материала.

Вот, в принципе, и все. Чтоб снизить себестоимость одного анализа, производители выпускают системы, предназначенные для проведения сразу нескольких десятков анализов.

Пока лаборатория не насобирает необходимое количество проб, приходится подождать. Отсюда проистекает необходимость долгого ожидания результатов, хотя сам процесс ПЦР длится 4-5 часов. Снизить влияние второго фактора можно путем обращения для сбора диагностического материала к квалифицированному врачу.

Постановка реакции

Для диагностики в разных случаях применяются разные методики. Сначала людям с показаниями к исследованию (мы перечисляли их немного выше) рекомендуется сделать качественную реакцию. И если она окажется положительной - то пролечиться и потом провести уже количественную ПЦР. Такой контроль после лечения позволяет убедиться в том, что терапия возымела эффект, и организм человека полностью очистился от уреаплазм.

Качественная проба

Аппарат для постановки ПЦР называется амплификатором.

Процесс состоит из трех этапов:

• Обработка исследуемого материала с целью «расплетения» нуклеиновых кислот в пробе (всех - и микробных тел и клеток самого человеческого организма) или денатурация. Длительность этого этапа - около минуты.
• Процесс гибридизации. Именно в это время проходит реакция поиска и идентификации ДНК материала уреаплазм. Требуется 20-60 секунд.
• Репликация обнаруженных нуклеиновых кислот искомых возбудителей - примерно 30 секунд.

Таких циклов проводится не менее 40, из-за чего общая длительность постановки ПЦР достигает часа и более. Затем 2-3 часа необходимо технике для подсчета результатов. Если в первом образце была обнаружены ДНК уреаплазмы, то к 40-му циклу количество таких ампликонов в исследуемом субстрате вырастает в геометрической прогрессии. И достигает той концентрации, когда их можно будет достоверно обнаружить иммунологическими методиками. В случае, когда в пробе не было изначально генома уреаплазм, то последующие циклы будут проходить как бы в холостую. И потому иммунофорез на плотном агаре или флуоресцентная детекция окажутся отрицательными.

Промышленностью выпускается несколько видов реактивов для второго этапа ПЦР. Среди них есть такие, что прореагируют только с ДНК U. parvum или только с ДНК U. Urealyticum. Или с только теми участками ДНК уреаплазм, которыми кодируется медикаментозная резистентность возбудителей. Это позволяет методике достигать беспрецедентной специфичности и за очень короткое время обнаруживать стойкость микробов к лекарствам.

Количественная проба

Ее еще называют ультрачувствительной. Отличие в том, что каждый вновь синтезированный ампликон помечается молекулой люминофора и светится под ультрафиолетом. После 30-40 циклов амплификации специальный аппарат проводит хроматографический анализ пробы и подсчитывает количество «маячков». Затем математическими методами рассчитывает исходное число микробных тел.

Комплекс ПЦР хламидии, уреаплазма и микоплазма

Эпидемиологической особенностью современных инфекций, передающихся половым путем (ИППП) является микст. То есть передача сразу нескольких возбудителей.

Практика показывает, что вместе с возбудителями класса Mollicutes часто обнаруживаются хламидии. Для них также характерно вялое малосимптомное воспаление. Поэтому существенное клиническое значение приобретает комплексная диагностика пациентов.

В особенности - женщин, планирующих беременность или с признаками хронических воспалительных процессов со стороны органов малого таза.

Тогда грамотный врач поступает так:

• Сначала делает микроскопию обычного гинекологического или урологического мазка.
   

• При наличии признаков воспаления без явного возбудителя - назначается комплекс ПЦР.

Возможности современных лабораторий позволяют сделать молекулярно-генетический анализ сразу на несколько возбудителей с дифференцировкой каждого вида. То есть в результатах указывается факт наличия или отсутствия у пациента отдельно хламидий, отдельно микоплазм и отдельно - уреаплазм. Такая возможность удешевляет диагностику и заодно - делает ее более полной, разносторонней.

Дальнейшая врачебная тактика зависит от результатов обследований. Идеальный результат терапии - если на ПЦР ДНК уреаплазм после лечения не обнаружено. Достичь негативизации результатов можно только в сотрудничестве с квалифицированным дерматовенерологом.